ГоноСлайд(2х30)
ГоноСлайд(2х30) для выявления АГ Neisseria gonorrhoeae
ГоноСлайд™
Инструкция по применению антител диагностических ГоноСлайд™ для выявления антигенов Neisseria gonorrhoeae методом непрямой иммунофлюоресценции (РнИФ), сухих.
Гонококки — основные патогенные микроорганизмы урогенитального тракта. Особым тропизмом гонококки обладают к цилиндрическому эпителию (диаметр гонококка от 0,6-1 до 1-2 мкм), размножаясь делением в разных плоскостях, не образуя цепочек. Характерно внутриклеточное расположение возбудителей в сегментоядерных лейкоцитах. В организме больного гонококки часто претерпевают L-трансформацию. Для таких гонококков характерна вогнутая, как у боба, сторона. Обычно они располагаются попарно, вогнутой стороной друг к другу, как вне-, так и внутриклеточно.
Подготовка материала для исследования
Забор материала производится при многочасовой задержке мочи (4-6 часов). Перед лабораторным исследованием больные не должны принимать противомикробные препараты в течение 7-ми дней.
У женщин забор материала производят со слизистых уретры, шейки матки и заднего свода влагалища (после удаления выделений), у мужчин — со слизистой уретры.
Для получения материала со слизистых используется одноразовый зонд, имеющий ватный тампон с повышенной адсорбцией, или пластиковый зонд с синтетическим ворсом.
Материал собирают вращательным движением зонда. Непосредственно после взятия материала готовят однослойный мазок-отпечаток, касаясь поверхности лунки предметного стекла.
Предметное стекло заранее маркируют, указывая Ф.И.О. больного и дату взятия пробы. Приготовленный мазок высушивают на воздухе. Высушенный мазок фиксируют 96 %-ным этанолом в течение 5 минут или наносят на мазок 2-3 капли ацетона до полного его испарения. Стекло с фиксированным мазком может храниться при температуре +2-8 °С в течение 10 суток.
Постановка РнИФ
Вскрывают флакон препарата «ГоноСлайд» с антителами гонорейными (флакон №1) и флакон с ФИТЦ-меченными антителами (флакон №2). Добавляют по 1 мл дистиллированной воды в каждый флакон и растворяют содержимое в течение 1-2 мин. при комнатной температуре, слегка встряхивая флаконы. Растворенные реагенты можно хранить в темноте при температуре +2...+8 °С в течение 10 суток. Замораживание растворенных реагентов не допускается.
1.На мазок микропипеткой наносят 30 мкл раствора из флакона №1. Стекло помещают во влажную камеру и выдерживают при комнатной температуре или в термостате при 37 °С в течение 15 мин.
2.Стекло промывают в проточной водопроводной воде 2 мин., ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
3.На мазок микропипеткой наносят 30 мкл раствора из флакона №2. Стекло помещают во влажную камеру и выдерживают при комнатной температуре или в термостате при 37 °С в течение 15 мин.
4.Стекло промывают, как описано в п. 2.
5.На высушенный мазок наносят каплю монтирующей жидкости, накрывают покровным стеклом и микроскопируют в люминесцентном микроскопе или с использованием люминесцентной насадки к обычному оптическому микроскопу.
Рекомендуется использовать масляную иммерсию с объективом МИ 90* и окулярами 4-7» или водно-иммерсионную систему с объективами ВИ 60-70* и окулярами 5-10».
Используют микроскоп с фильтрами, обеспечивающими возбуждающий свет с длиной волны не более 490 нм и эмиссию с длиной волны 520 нм.
Порядок расположения фильтров в микроскопе (от лампы):
1.БС-8-3 2.СЗС-24-4 3.ФС-1-4
Учет результатов
Гонококки выявляются в виде полиморфных мембраноограниченных кокков, имеющих ярко-зеленое свечение.
Неспецифическая бактериальная микрофлора окрашивается в оранжевый цвет; клетки эпителия, лейкоциты и сперматозоиды - в оранжевый и красно-бурый цвет. Допускается неспецифическое диффузное слабо-зеленое свечение цитоплазмы эпителиальных клеток, слизи и посторонней микрофлоры.
Результат считается отрицательным, если в мазке отсутствует специфическое свечение при обязательном наличии не менее 10 клеточных элементов.
Срок годности набора 1 год с даты изготовления.
1. Антитела (1) гонорейные, сухие, 1 мл - 2 фл.
2. Антитела (2) ФИТЦ-меченные, сухие, 1 мл -2 фл.
3. Жидкость монтирующая, 1 мл – 1 фл.
4. Ложемент-штатив.
5. Инструкция по применению.